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        魚源性成分(Fish)核酸試劑盒說明書

        產品簡介

        魚源性成分(Fish)核酸試劑盒說明書
        上海聯祖生物相關產品:
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        二氧六環(標準品)二(*硅烷基)炔

        硝普鈉(標準品)5-溴-2-氟甲酸

        富馬酸酮替芬雜質I(10-甲氧基-(1-甲基-哌啶基)-4H-并[4.5]環庚[1.2-b]噻吩-)(標準品)(S)-(-)-叔丁基亞磺

        更新時間:2021-03-13
        訪問次數:1074
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        組成及試劑配制:
        1、酶標板:一塊(96孔)
        2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
        注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

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         產品名稱

         魚源性成分(Fish)核酸試劑盒說明書

         規格

         48T

         貨號

         LZP8163

        實驗過程:
        一、試劑準備
        1. DNA模板
        2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
        4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
        三、注意事項
        1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
        2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
        3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
        4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
        6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
        一、 試劑的準備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
        試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
        熒光PCR反應液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
        7.2 qPCR反應條件
        將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
        推薦循環條件:
        1循環 50℃ for 2 min
        預變性 1循環 95℃ for 10 min
        PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
        降二氫辣椒2-煙酸酯

        2,二(標準品)甲基吡唑

        甲氨基安替比林(標準品)?;悄懰徕c

        硫酸肼(標準品)1-芐基-氧羰基-哌啶酮鹽酸鹽

        硫酸肼(標準品)6-溴茚酮

        環扁桃酯(標準品)3,5-二氨基-6-吡-2-羧酸甲酯

        重腎上腺素(標準品)三基膦醋酸鈀

        氨基三酸(標準品)溴-2-甲基

        1,(標準品)叔戊鈉

        二甘(標準品)1,3,5-三叔丁基

        噻(標準品)環庚甲酸

        鹽酸阿米洛利雜質(氨基-6--1,基二硫酰)(標準品)三丁基化錫

        鹽酸地芬尼多雜質(化合物)(標準品)氨基吡啶-2-羧酸

        二氧六環(標準品)二(*硅烷基)炔

        硝普鈉(標準品)5-溴-2-氟甲酸

        富馬酸酮替芬雜質I(10-甲氧基-(1-甲基-哌啶基)-4H-并[4.5]環庚[1.2-b]噻吩-)(標準品)(S)-(-)-叔丁基亞磺酰

        5-硝基糠二酸酯(標準品)2,6-二甲氧基甲酸

        后馬托品(標準品)2-腺嘌呤核苷

        α2纖溶酶色素上皮衍生因子Phospho-ETK (Tyr40) /FITC  熒光素標記兔抗、大、非受體性蛋白酪氨酸激酶ETKIgG100 ul

        膜粘連蛋白7E Tag/FITC  熒光素標記抗E TagIgG100 ul

        早老素γ分泌酶ets1/E26 /FITC  熒光素標記Ets轉錄因子家族ets1IgG100 ul

        ATP酶蛋白a1Eukaryotic aspartyl proase/FITC  熒光素標記天冬氨酸蛋白酶家族蛋白IgG100 ul

        Rho鳥苷酸交換因子2EV71/FITC  熒光素標記腸道病毒71型/手足口病病毒IgG100 ul

        酸化Rho鳥苷酸交換因子2EV71(CT)/FITC  熒光素標記腸道病毒71型/手足口病病毒(C端)IgG100 ul

        去整合素樣金屬蛋白酶9EXPB-2/FITC  熒光素標記植物延展素-βIgG100 ul

        艾滋病病毒制約錨定蛋白Ezrin/Radixin/FITC  熒光素標記埃茲蛋白IgG100 ul

        腺苷酸環化酶1Phospho-Ezrin (Tyr353) /FITC  熒光素標記兔抗、大、埃茲蛋白IgG100 ul
        魚源性成分(Fish)核酸試劑盒說明書細胞分裂周期2樣蛋白激酶5抗體Niazirin中文名:別名:分子式:C14H175

        神經酰胺激酶CERK抗體Protosappanin A中文名:原蘇木素A別名:分子式:C15H12O5

        細胞分裂周期樣激酶2抗體Saropyrone中文名:別名:分子式:C16H16O5

        細胞分裂周期樣激酶3抗體Marumoside A中文名:別名:分子式:C14H196

        維甲酸調節核基質相關蛋白抗體1-(4-Hydroxy-2,2-dimethylchroman-6-yl)ethane中文名:別名:分子式:C13H16O3

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