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        PCR純化試劑盒

        產品簡介

        合成酶(GLUL)ELISA試劑盒Sema3F 臂板蛋白3F100 ul

        谷氨酰(Gln)ELISA試劑盒Sema4C 臂板蛋白4C20 ul

        谷氨酸脫羧酶自身IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA試劑盒Sema6A Sema6A100 ul

        谷氨酸脫羧酶自身IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA

        更新時間:2021-03-15
        訪問次數:984
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        注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

         產品名稱

         PCR純化試劑盒

         規格

         50T

         貨號

         LZP7913

        組成及試劑配制:
        1、酶標板:一塊(96孔)
        2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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        實驗過程:
        一、試劑準備
        1. DNA模板
        2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
        4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
        三、注意事項
        1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
        2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
        3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
        4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
        6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
        己烷雌酚;去氫己雌酚SDF1 (D32F9) Rabbit mAb1,5-二氟-2,二

        GTP;鳥苷-5‘-三酸鈉鹽Btk (C82B8) Rabbit mAb二亞酸甲酯

        肌苷-5’-酸二鈉鹽SFRP1 (D5A7) Rabbit mAb綠原酸

        尿苷-5’-二酸鈉鹽(UDP)GATA-1 (D52H6) XP® Rabbit mAb雙十二烷基二甲基溴化銨

        5’-尿苷酸二鈉(UMP)GATA-1 (D52H6) XP® Rabbit mAb間二(三氟甲基)

        dAMP-Na2;脫氧腺苷酸二鈉eNOS (D8A6N) Rabbit mAb對叔丁基芐

        ATP.Na2; 腺苷-5’-三酸二鈉鹽水合物β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjuga)三氟甲基水楊酸

        阿帕替尼甲磺酸鹽CD7 Antibody1-*基咪唑-甲

        cAMP;環酸腺苷,環腺苷酸,環腺苷CD27 (O323) Mouse mAb (FITC Conjuga)溴-1-丁

        環酸腺苷,環腺苷酸(標準品)Phospho-Btk (Ser180) (3D3) Mouse mAbN'-Cbz-L-鳥氨酸

        PR-619; 2,6-二氨基-3,5-二硫基吡啶GLI1 (C68H3) Rabbit mAb1H-咪唑-4,5-二甲酸二甲酯

        5'-胞苷酸(CMP)GLI1 (C68H3) Rabbit mAb紫杉

        5-甲酰水楊酸Rab11 Antibody咖啡酸

        D-核糖-5-酸二鈉鹽Phospho-NPM (Thr199) Antibody氟-甲氧基溴芐

        蘇木色精,蘇木素NPM Antibody3,4,5-三吡啶

        核苷酸5’-一酸腺苷鈉鹽;AMP鈉鹽Bit1 Antibody2--6-基吡啶

        CTP.Na2;胞苷-5’-三酸二鈉鹽SLP-76 (D1R1A) Rabbit mAb (PE Conjuga)鹽酸地爾硫卓

        5-甲基尿苷FABP4 (D25B3) XP® Rabbit mAb氧基鹽酸鹽

        谷胱甘肽S轉移酶(GSTs)ELISA試劑盒Selenoproin W  硒蛋白W100 ul

        谷胱甘肽(GSH)ELISA試劑盒Sema3A  臂板蛋白3A100 ul

        谷氨酰合成酶(GLUL)ELISA試劑盒Sema3F  臂板蛋白3F100 ul

        谷氨酰(Gln)ELISA試劑盒Sema4C  臂板蛋白4C20 ul

        谷氨酸脫羧酶自身IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA試劑盒Sema6A  Sema6A100 ul

        谷氨酸脫羧酶自身IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA試劑盒Sema7A/CD108  軸突生長因子CD10820 ul

        谷氨酸脫羧酶1(GAD1)ELISA試劑盒SFRP1  分泌型卷曲相關蛋白1100 ul

        谷氨酸脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA試劑盒SGC (soluble glycoproin C)  可溶性糖蛋白C100 ul

        谷氨酸ELISA試劑盒SGLT1  鈉-糖共轉運載體1100 ul
        PCR純化試劑盒抑制蛋白結構域蛋白2抗體Paxiphylline E中文名:別名:Daphnilongeranin A N-oxide分子式:C23H295

        抑制蛋白結構域蛋白3抗體Daphmacropodine中文名:別名:分子式:C32H514

        抑制蛋白結構域蛋白4抗體Allantoin中文名:尿囊素別名:分子式:C4H6N4O3

        雌二醇抗體6-Acetonyldihydrosanguinarine中文名:6-丙酮基二氫血根堿別名:8-Acetonyldihydrosanguinarine分子式:C23H195

        細胞分裂周期蛋白16抗體6-Acetonyldihydrochelerythrine中文名:別名:8-Acetonyldihydrochelerythrine分子式:C23H195
        檢測步驟:
        一、 試劑的準備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
        試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
        熒光PCR反應液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
        7.2 qPCR反應條件
        將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
        推薦循環條件:
        1循環 50℃ for 2 min
        預變性 1循環 95℃ for 10 min
        PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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