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        RT-PCR試劑盒的PCR反應及注意事項說明

        更新時間:2022-06-27點擊次數:643
           RT-PCR試劑盒合適的溫度通常在45-68℃之間(預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60-68℃間,也有很高的活性,因此可在此溫度范圍內設定溫度,進行2 Step PCR。
          RT-PCR試劑盒是為兩步法RT-PCR一步實驗配制的,具有高靈敏度的RT-PCR反應系統,可以從極低量的總RNA或poly(A)+RNA合成一鏈cDNA。與PCR反應相結合,可用于檢測稀有基因的表達、從極少量細胞中定量檢測特定mRNA的表達水平、克隆特定基因的cDNA片段等。合理配備與cDNA一鏈合成反應相關的各種組分,該試劑盒有高效的逆轉錄酶活性,對后續的PCR或定量PCR實驗兼容性好,適合于各種PCR耐熱聚合酶。
          RT-PCR試劑盒試驗時進行的PCR反應:
          1.吸取10%的一鏈反應液(2μl)進行PCR反應;即使加入更多量的一鏈反應液也不能增加其擴增的產物量,反而可能會抑制正常的PCR反應;
          2.94℃加熱變性2min;
          3.設置15-40個PCR循環。退火與延伸條件依引物和模板而定。
          相關注意事項:
          1.用于cDNA合成反應的溶液試劑盡量可能用DEPC進行處理,并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時,首先用經過滅菌的器具、水等配制溶液后,再將溶液進行過濾除菌處理。
          2.RNA樣品要避免基因組DNA污染。
          3.避免多次反復凍融RNA,使RNA保持在冰浴中處融化狀態。
          4.試劑盒的各組成成分應在-20℃保存。
          5.cDNA產物應置于-20℃保存。

        TEL:021-61210612

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